首烏藤超微飲片的液相色譜指紋圖譜研究

【摘要】 目的研究首烏藤超微飲片的指紋圖譜。 方法色譜柱為大連依利特公司Hypersil BDS C18（4.6 mm×200 mm,5μm）。流動相為乙腈-1%冰醋酸,柱溫為35℃,流速為1.0 ml/min,檢測波長為254 nm，進樣量為20μl。結果初步建立了首烏藤超微飲片的HPLC指紋圖譜，標定了9個共有指紋峰。結論利用首烏藤超微飲片液相色譜（HPLC）指紋圖譜可以較好地反映首烏藤超微飲片的內在質量。

　　【關鍵詞】  首烏藤超微飲片 液相指紋圖譜 液相色譜法

　　Abstract:ObjectiveTo determine the HPLC fingerprint of Caulis Polygoni Multiflori. MethodsChromatographic column was Hypersil BDS C18 （4.6 mm×200 mm,5μm）. phase was acetonitrile-1% glacial acetic acid in water.Column temperature was 35℃, the Flow rate was 1.0 ml·min-1, the detection wavelength was 254 nm and the sample size was 20μl.ResultsThe fingerprint of Caulis Polygoni Multiflori was established and 9 common peaks were in the fingerprint.ConclusionThe method and data can be used to control the quality of the caulis polygoni multiflori.

　　Key words:Caulis Polygoni Multiflori；  Fingerprint；  HPLC

　　首烏藤為蓼科植物何首烏Polygonum multiflorum Thunb. 的干燥藤莖, 具養血安神，祛風通絡功能。用于失眠多夢，血虛身痛，風濕痹痛；外治皮膚瘙癢［1］。首烏藤的主要有效成分為大黃蒽醌。本文通過對四川、北京、湖南、江西、南京等10個不同地區的商品首烏藤藥材制成的超微飲片進行測定，建立指紋圖譜，并對首烏藤超微飲片中大黃素的含量進行了測定。

　　1  儀器與試劑

　　1.1  儀器

　　液相色譜儀（島津LC-10ATVP液相色譜儀，紫外檢測器SPD-10AVP，島津色譜工作站），AE240型電子分析天平。

　　1.2  試劑乙腈為色譜純，其它試劑均為分析醇，水為重蒸餾水。

　　1.3  對照品大黃素（ 供含量測定用,中國藥品生物制品檢定所提供）。

　　1.4  藥材

　　10批商品首烏藤藥材分別購自四川、北京、湖南、江西、南京等地。加工成超微飲片。

　　2  方法與結果

　　2.1  供試品溶液的制備取首烏藤超微飲片，取約0.5 g，精密稱定，加甲醇40 ml加熱回流提取2次，1 h/次，濾過，合并濾液，水浴蒸干，殘渣加甲醇使溶解，置25 ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

　　2.2  對照品溶液的制備取大黃素對照品約5 mg，精密稱定，置10 ml量瓶中，加甲醇使溶解并至刻度，搖勻，即得。

　　2.3  色譜條件色譜柱為大連依利特公司Hypersil BDS C18柱（4.6 mm×200 mm,5 μm）, 流動相為（A）乙腈-（B）1%冰醋酸,柱溫為35℃,流速為1.0 ml/min,檢測波長為254 nm，進樣量為20μl。流動相比例，見表1。表1  流動相比例（略）

　　2.4  方法學考察

　　2.4.1  精密度實驗取同一份首烏藤超微飲片的供試品溶液連續進樣5次，比較各共有指紋峰的相對保留時間與相對基線構成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面積，結果表明各共有指紋峰的相對保留時間與相對峰面積基本一致，RSD＜2%，見表2～3，符合指紋圖譜的檢測要求［1］。表2  精密度實驗結果（略）表3  精密度實驗結果（略）

　　2.4.2  穩定性實驗取同一份首烏藤超微飲片的供試品溶液，分別在制備后0，2，4，6，8 h進樣，比較各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，結果表明各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致，RSD＜2%，樣品在8 h內穩定，符合指紋圖譜的檢測要求。

　　2.4.3  重復性實驗取同一批首烏藤超微飲片樣品5份，分別按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，進行測定，比較各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，結果表明各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致，RSD＜2%，符合指紋圖譜的檢測要求。

　　2.5  指紋圖譜的建立

　　2.5.1  共有指紋峰的標定采用相對保留時間標定共有指紋峰，以圖譜中大黃素為參照物，將各拖尾峰（tailing peak）。前者少見。>色譜峰保留時間與同一圖譜中參照物的保留時間比較，其比值為各色譜峰的相對保留時間（見表4），計算10批不同地區藥材制成的超微飲片指紋圖譜中各色譜峰的相對保留時間，其中9個色譜峰為各樣品所有，故標定它們為共有指紋峰。各共有指紋峰的相對保留時間分別為：峰-1（0.112 2）、峰-2（0.155 9）、峰-3（0.251 5）、峰-4（0.267 1）、峰-5（0.380 8）、峰-6（0.404 1）、峰-7（0.447 9）、峰-8（0.535 0）、峰-S（1.000 0）。表4  10批首烏藤超微飲片各共有峰的相對保留時間（略）

　　2.5.2  共有指紋峰的相對峰面積以圖譜中大黃素為參照物，將各色譜峰峰面積與同一圖譜中參照物的峰面積比較，其比值為各色譜峰的相對峰面積，見表5。表5  10批首烏藤超微飲片樣品部分共有峰的相對峰面積（略）

　　2.6  15批首烏藤超微飲片由于產地不同，其大黃素的含量也有差別見表6。表6  樣品的來源及大黃素含量（略）

　　2.7  相似度計算采用中南大學“計算機輔助相似性評價系統”進行相似度計算。10批樣品的相似度均在0.9以上。

　　3  討論

　　超微飲片是我院研制的一種新型飲片，采用指紋圖譜技術控制其質量具有較強的專屬性。

　　參照物的選擇：首烏藤超微飲片中大黃素的含量較高, 因此選擇其作為參照物，在圖譜中為S號峰。各樣品的中的大黃素參照峰是根據其保留時間與大黃素的保留時間基本一致而確定的。

　　色譜柱選擇：分別用依利特C18色譜柱（4.6 mm×200 mm，5μm）與 MetaChem C18色譜柱（4.6 mm×200 mm 5μm）兩種色譜柱進行首烏藤超微飲片指紋圖譜分析，結果表明，依利特C18色譜柱（4.6 mm×200 mm，5μm）分離效果較好，故選擇依利特C18色譜柱。

　　測定結果表明不同地區的大黃素含量差異較大，可能是生長條件及加工方法不同而致。應通過對多地區多批次樣品進行含量測定，制定適宜的含量限度，確保超微飲片的質量。

　　【參考文獻】

　　［1］國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部［J］.北京：化學工業出版社，2000：201